人间充质干细胞免疫学效能专题

随着细胞和基因类治疗技术的不断发展，其使用的安全性一直是大家关注的焦点。明鉴技术团队将推出系列专题，带大家了解细胞类产品使用前必做的检测项目。

人间充质干细胞（human mesenchymal stem cells，hMSCs）是一类存在于不同组织间质或血管周围、形态类似于成纤维细胞的成体干细胞。是目前处于临床应用及研究阶段干细胞类型中发展最为迅速的干细胞类型。hMSCs的生物学有效性是指临床前研究阶段，与hMSCs临床治疗效应相对应或可用于预测临床治疗效应相关的生物学功能，是目前hMSCs产品综合质量评价的重要内容。

hMSCs的生物学有效性可归纳为三大类：多向分化潜能、免疫调控功能和组织再生功能。其中，免疫调控功能是指hMSCs可与机体内几乎所有的免疫细胞相互作用并调节其功能，抑制促炎性免疫细胞增值和/或活性、抑制促炎因子释放，同时促进调节性免疫细胞增值或极化，用于改善局部病损组织的微环境、抑制过激的炎症反应或调控异常免疫反应。

不同组织来源的hMSCs均具有不同程度的生物学有效性，而不同制备工艺、培养条件和技术、特殊细胞处理方法、细胞培养过程中的隐性微生物或微生物代谢产物污染、细胞体外过度扩增所伴随的细胞老化等因素，都会对hMSCs的生物学有效性产生不同程度的影响，进而影响其临床治疗效果。

对制备过程中不同阶段的中间细胞，或终末细胞制剂进行生物学有效性检测，可在确保相关细胞产品质量的同时，有效保障其临床应用安全性及有效性。

为规范和引导人源性干细胞产品的药学研究，国家药品监督管理局药品审评中心形成了《人源性干细胞产品药学研究与评价技术指导原则》（征求意见稿）。原则中的质量研究指出研发者应明确产品与临床治疗相关的生物学效应和作用机制，开发能够代表产品作用机制的定量/半定量生物学活性测定方法，尽可能采取多种互补的分析检测方法进行研究并完成方法学验证。

质量标准中要求考虑到部分干细胞产品批量有限、有效期短的特殊性，在经过充分研究的基础上，可通过加强过程控制和中间体的检测来简化放行检测（简化的放行检查必须至少包含鉴别和生物学效力检测）。

我国2015年8月推出的《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》（简称《指导原则》）提出了2种主要的干细胞质量评价规范，即“质量检验”和“放行检验”。其中，“质量检验”包括了生物学有效性（即多向分化潜能、免疫调控功能、组织再生功能）。

国际细胞治疗协会（ISCT）于2013年提出了应在不同组织来源的hMSCs生物学效应评价中纳入对其免疫调控功能的评价。

4.1 hMSCs与免疫细胞相互作用

通过hMSCs与有丝分裂原（如PHA或ConeA等）或CD3及CD28抗体诱导活化的PBMC共培养，可观察到hMSCs抑制T淋巴细胞的激活和增值。在调控不同T淋巴细胞亚群方面，hMSCs可有效抑制促炎性淋巴亚群Th1和Th17的增值和相应细胞因子分泌，促进Th17分化为调节性T细胞（Treg）。

4.2 hMSCs抑制人淋巴细胞增值

以羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）标记法作为hMSCs抑制淋巴细胞增值的常规评价方法。hMSCs对PHA激活的PBMC增值有显著抑制作用。

hMSCs抑制Th1和Th17细胞增值  hMSCs与异体人PBMC共培养后，分析淋巴细胞亚群Th1（CD3+CD8-IFN+）和Th17（CD3+CD8-IL-17A+）的比例变化，hMSCs可有效抑制Th1和Th17细胞增殖。

4.3 hMSCs促进Treg细胞增值

hMSCs与异体人PBMC共培养后，分析CD4+CD25+CD127-细胞亚群（Treg亚群）的比例变化，hMSCs显著增加Treg亚群比例。

明鉴细胞检测依据法规要求，参考现有行业检测技术，可提供符合法规规定的hMSCs免疫调控能力检测，包括hMSCs抑制Th1和Th17细胞增值、hMSCs抑制人淋巴细胞增值及hMSCs促进Treg细胞增殖等检测项目。